近期,江南大学刘龙老师的研究团队在《Nucleic Acids Research》(影响因子166)上发表了题为《Across-species inducible system for enhanced protein expression and multiplexed metabolic pathway fine-tuning in bacteria》的文章,其中的尊龙凯时产品StarLighter Hot Start Taq Pro PCR Mix(FS-P5001,尊龙凯时热启动Taq Pro PCR预混液)为此研究做出了重要贡献。
诱导系统的重要性
诱导系统在生物医学工程和合成生物学中扮演着至关重要的角色,通过添加诱导剂来精确控制基因的激活和抑制。这种机制相较于组成型表达系统,可以有效减轻宿主细胞的代谢负担,从而提高各类生物产品(如重组蛋白、药物分子和生物材料)的产量。
跨物种诱导系统的研究进展
然而,现有的诱导系统往往是菌株特异性的,这限制了跨物种的比较分析与应用。在这项研究中,文章介绍了一种新型的跨物种诱导系统,能够在细菌中优化蛋白质表达和多重代谢途径调控。研究团队开发了两种重建的诱导系统(PphlF3R1和无水四环素诱导系统Ptet2R2*),并在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和谷氨酸棒状杆菌等模型微生物中进行实验验证。
系统设计与优化
在研究过程中,科学家选择了9个已报道的诱导系统,包括IPTG和木糖诱导系统,采用理性设计与随机突变的方法对其进行重构,使之能够在不同菌株中有效表达。此外,通过引入突变抑制子表达文库对诱导系统进行进一步优化,成功减少了泄漏表达的现象。
性能测试与应用
研究人员将诱导系统应用于质粒和基因组,并测试了在三种细菌中的表达性能。最终构建了两个跨物种诱导系统:DAPG诱导系统PphlF3R1和无水四环素(aTc)诱导系统Ptet2R2*。经过优化,P_tet2R2*在所有三种菌株中表现出了低泄漏、宽动态范围以及适当的表达强度和敏感性。
未来的研究方向
这种诱导系统被有效地用于调控多种报告蛋白(如sfGFP、mCherry和mScarlet3)及基因簇(比如crtEIB、crtEIBY和vioABCDE)的表达。此外,该研究还开发了基于T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)和dCas12a的单输入基因回路,用于同时激活和抑制基因表达。
这项研究的突破性意义在于提供了一种跨物种的诱导系统,具有重要的应用价值,尤其是在比较不同菌株之间的基因表达及功能、以及在合成生物学和生物医学工程中构建复杂的生物系统方面。利用尊龙凯时的优质产品,研究人员能够更高效地控制蛋白质的表达和代谢途径的调控,从而显著提高生物合成的效率和产量。