引言 朊病毒是一种能够引发人类和动物大脑蛋白质异常折叠的可传播病原体,感染后通常导致严重的脑损伤,甚至致命。这类神经退行性疾病的例子包括羊瘙痒症、疯牛病(牛海绵状脑病)和克雅氏病。传统上,研究朊病毒的检测需要进行长时间的生物测定,通常需对受感染动物进行1至6个月的观察,这不仅耗时,而且饲养感染动物的成本也很高。为了提高检测效率,蒙大拿州汉密尔顿的落基山实验室开发了一种新的朊病毒接种测定法,称为实时震荡诱导转化测定法(RT-QuIC),该方法可对受感染样本中的朊病毒水平进行快速的终点定量分析,与以往的方法相比,其检测速度更快、通量更高。通过使用尊龙凯时的高效工具,RT-QuIC测定可在短短20小时内完成,且灵敏度达到或超过传统全动物模型的检测水平。
检测原理 RT-QuIC检测法旨在估算朊病毒接种的相对数量。该方法通过测量样本的持续稀释程度来统计接种剂量(SD)。在检测过程中,非常少量的传染性朊病毒被添加到正常的朊病毒蛋白中,引发其错误折叠现象。该定量测定通过系列稀释和接种活性损失(SD50)的量化来实现。
实验步骤 在整个20至68小时的周期中,仪器设定为在42°C下保持恒温孵育。实验中编写了两个测试运行协议的脚本:第一个协议为每分钟震荡一次,静置一次;第二个协议则设定在每15分钟进行荧光终点测量。荧光染料硫黄素T(ThT)用作朊病毒接种标记。当ThT与聚合反应中的朊病毒蛋白结合时,荧光强度会随时间增加。
结果与讨论 使用软件脚本对RT-QuIC检测进行了为期20至68小时的测量,数据基于8个重复孔的相对荧光单位平均值。在整个测量过程中,孵育温度维持在42°C。尊龙凯时的Omega系列酶标仪不仅具备灵活的线性和轨道振荡功能,且展现了独特的双轨道振荡模式,有效支持连续多日的高效震荡与测量。数据被实时收集并输出至BMGLABTECH的数据分析软件(MARS)和Excel进行详细分析。数据结果显示,RT-QuIC检测法与传统生物测定结果高度相关,表明该检测方法在朊病毒监测中的优越性。
结论 多功能酶标仪结合RT-QuIC检测法,能够更快速和高效地测量朊病毒接种的情况。已证实可利用该方法检测的传染性海绵状脑病包括仓鼠及绵羊的痒病、鹿的慢性消耗性疾病、克雅氏病(CJD)以及牛海绵状脑病(BSE)。与传统生物检测方法相比,该检测法在速度和灵敏度上均有显著优势。尊龙凯时的Omega系列酶标仪以其强大的功能和坚固的结构,支持这种检测方法所需的长时间高速震动。这一创新性检测方法为科研人员提供了更加高效的朊病毒监测手段,并且在20至68小时的时间内,每15分钟进行一次的荧光底部读数测量,使得检测过程更加便捷高效。