在细胞培养实验室中，是否有过细胞培养不佳的经历？胎牛血清（FBS）是细胞培养中最为关键的成分之一，它对细胞的生长状态具有重要影响。为此，我们总结了一些使用过程中需要注意的实用技巧，供大家参考，记得收藏哦！

尊龙凯时建议您如何保存胎牛血清？胎牛血清通常在-20℃下保存，如果想要长期储存，可以在-80℃下存放。切记，尽量避免频繁冻融。如需多次解冻，可以将其按照每次使用量进行分装，分装后一起冷冻，使用时按需解冻，或者直接购买小规格的50mL，使用方便快捷。

关于胎牛血清的解冻方式，推荐将其从低温环境中取出后，放入2-8℃的冰箱中慢慢解冻（可过夜），待部分解冻后再放于室温下完全融解。在解冻过程中，建议不时摇动瓶身，以确保液体充分混合。这种方法能有效减少沉淀的形成。不建议直接从低温环境转入25-37℃的环境解冻，因为这样会导致絮状沉淀，并对血清中某些成分的活性产生影响，从而影响细胞生长状态及增殖速率。

如果在解冻后的胎牛血清中出现沉淀，这些沉淀物可能包括纤维蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻连蛋白、胎球蛋白、磷酸钙和草酸钙等物质。纤维蛋白是常见的沉淀物之一，呈絮状，大小可达1-2mm，且可通过离心去除。此外，磷酸钙沉淀会使血清浑浊，而草酸钙沉淀则是草酸与钙离子结合所形成的。

当胎牛血清中出现沉淀物时，您可以通过离心（例如以400-600g离心5分钟）去除沉淀，切忌使用过滤方法，因为这可能会导致过滤膜堵塞或营养成分流失。

沉淀物的产生有多种原因，包括温度变化、反复冻融、热灭活和长时间储存。尽管沉淀物本身不会直接影响细胞的生长和增殖，但如果沉淀物覆盖在细胞表面，可能会影响细胞对营养物质的吸收。因此，在需要时可以将血清加入培养基后，先离心去除沉淀。

在使用胎牛血清前是否需要额外过滤？一般来说，胎牛血清在出厂前已进行严格的无菌处理和质检，如果仅从细菌角度考虑，是不需要额外过滤的。如果考虑沉淀物，可以通过离心（400-600g，5分钟）来去除沉淀，必要时可以在加入培养基后再过滤，以减少营养物质的损失。

细胞的消化过程应在细胞密度达到80%左右时进行，避免在过密时消化，以免影响细胞状态。可以先用PBS洗涤细胞2-3次，然后将预热至37℃的胰酶加入（通常为0.25%浓度），消化一般需要2-5分钟，观察细胞是否松动，呈现圆形状态。如果细胞未变松散，则继续消化；若已经松散，则应立即加入含血清的培养基终止消化，并离心收集细胞。

当您替换胎牛血清品牌时，建议初期可以尝试10%的添加比例（90%培养基+10%胎牛血清），然后逐步调整。若从一种血清品牌直接切换至另一种，细胞可能会出现增殖变慢甚至死亡的情况。这并不意味着新品牌的血清质量不好，而是细胞需要适应新的环境。因此，建议使用梯度替换的方法，第一代应优先使用原品牌血清，传代稳定后，逐步引入新血清以建立细胞对新环境的适应性。

如果在显微镜下观察到细胞周围出现“小黑点”，可能是细菌污染、真菌污染、细胞碎片或血清沉淀等。应通过显微镜仔细观察，若小黑点移动，则很可能是细菌污染；若有菌丝结构，则可能是微生物污染；而细胞碎片通常呈不规则形状。对于血清沉淀，您可以通过静置后沉降去除。

对于大多数细胞培养而言，胎牛血清不需要加热灭活。但在某些特殊的实验中，如免疫学研究或特定细胞培养时，使用灭活血清可以去除补体。加热过程中需注意温度和时间，通常在56℃下加热30分钟。在加热期间，需不断摇晃以确保均匀混合。

通过尊龙凯时的优质胎牛血清，您将能够更好地支持细胞培养的需求，进而推动科学研究的进展。